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免疫染色洗滌液從稀釋到使用的完整流程

 更新時間:2025-12-10 點擊量:36
  免疫染色洗滌液是免疫熒光(IF)、免疫組化(IHC)和免疫細胞化學(IC)等實驗中一抗或二抗孵育后的關鍵洗滌步驟,適當的洗滌可以降低背景、增強信噪比。
  一、稀釋配制
  1、10×濃縮液的稀釋方法:
  取一瓶免疫染色洗滌液(10×),倒入潔凈的量筒中,加入去離子水或蒸餾水混勻并定容到1升后即為免疫染色洗滌液(1×)。例如,100mL的10×濃縮液可配制成1L的1×工作液。
  2、保存條件:
  - 10×濃縮液:4℃保存,有效期1年
  - 1×工作液:4℃保存,1-2個月內用完;室溫保存宜在1-2周內用完
  - 注意:一旦啟用后建議在2周內用完,避免細菌污染
  二、使用步驟
  標準洗滌流程:
  1、在固定、一抗或二抗孵育結束后,加入適量免疫染色洗滌液(1×),使之能覆蓋樣品
  2、在搖床上緩慢搖動洗滌5分鐘
  3、吸盡洗滌液,再加入新的洗滌液洗滌
  4、共洗滌3次,每次5分鐘
  5、進行后續操作
  特殊情況處理:
  - 如果搖動容易導致樣品脫落,可以不搖動浸泡洗滌,但需延長洗滌時間至8-10分鐘/次,增加洗滌次數至4-5次
  - 如果背景仍然較高,可繼續增加漂洗時間和次數,通常延長洗滌時間或增加洗滌次數不會對免疫染色結果產生負面影響
  三、注意事項
  1、動作輕柔:所有操作動作要盡量輕柔,避免用力吹打細胞,防止樣品脫落
  2、避光操作:熒光染料標記的抗體孵育后需避光保存
  3、避免污染:本產品經過濾除菌處理,使用過程中應盡量避免細菌污染
  4、及時使用:一經開啟盡快用完,儲存過久的液體固定效果易下降
  5、溫度控制:盡量在4℃下操作,保持實驗環境穩定
  四、產品特點
  免疫染色洗滌液中含有適量Triton X-100,可以通透細胞膜,經處理的細胞樣品可以檢測細胞內的目的蛋白,包括細胞漿內和細胞核內的目的蛋白。按照每組樣品洗滌需要0.1-1mL計算,100mL的10×濃縮液可以洗滌1000-10000個樣品。
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