諾博萊德 Serum/Plasma miRNA Mini Kit

血清/血漿 microRNA 快速提取試劑盒

血清/血漿microRNA提取試劑盒

目錄號：91416

產品內容

自備試劑

無水乙chun、lv仿

保存條件

室溫（15 ~ 25℃）

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

產品簡介

裂解液 RLS 是 RNAzol LS Reagent ( 同 Trizo LS ,是濃縮型的 Trizol )，配合 miRNA 專用的溶液體系，專用于從動物及人體血漿和血清中提取miRNA 和其它各種小 RNA(15-30 nt )。

可以提出來包含 miRNA 的總 RNA，用于 miRNA 的 RT、qPCR 檢測，以及全轉錄組測序等；根據需要，也可以一次性把 miRNA 和總 RNA（mRNA、tRNA、rRNA）分別提出來。

近年來對 RNA 干擾和調節性小 RNA 的廣泛研究迫切需要一種能有效提取 15-30 核苷酸左右大小 RNA（包括 siRNA 和 miRNA）的試劑盒。但是市場上常見的離心柱型的 RNA Kit/總 RNA Kit 不能有效吸附回收 miRNA，Trizol 抽提法也不能有效沉淀回收 miRNA（生物通上有專題文章闡述），對于血清血漿樣本更是由于其自身特點更難提取。

產品特點

1. Serum/Plasma miRNA Mini Kit 質量優異，可以wan美替代 Qiagen 的miRNeasy Serum/Plasma Kit。

2. 本品可在常溫下提取 RNA，不需要 4℃離心機；亦可以兼容 4℃離心機。

注意事項

1. 血液 RNA 的常溫保存/運輸/提取的簡易方案：

臨床取樣：在臨床上，使用抗凝管采血后，取 250 μl 新鮮血液，加入 750μl的裂解液 RLS ( RNAzol LS Reagent，Cat#R012-100)，用移液槍反復抽打并振蕩混勻，在室溫裂解 5~10 min，直至血細胞充分發生裂解。

保存：經裂解后的血液可在-20℃下保存 1-2 個月，在-70℃保存半年。

運輸：可冰袋 4℃運輸 1 天，干冰-20℃運輸一周。

提?。?/span>后續 RNA 提取按 R213（或 R012）的說明書進行。

2. RNA 純度及濃度檢測：

血清/血漿的 RNA 含量特別低，已經低于分光光度計測量的下限，無法準確測量，因此無法通過測量 OD 值或者比值的方法來判斷濃度或者純度，只能通過下游做 RT-qPCR 來判斷產量。同時無細胞的血清/血漿中的 RNA 主要是小于 100 nt 的 miRNA，因此跑電泳檢測 RNA 完整性并不適用于血清/血漿 RNA。

3. Wash Solution 2/3 可能加入乙chun使用幾天后，可能會出現沉淀晶體，并不影響使用，取其上清直接使用就可以。

操作步驟 （得到包含 microRNA 的總 RNA）

提示：

第一次使用前，請先在 Wash Solution 1、Wash Solution 2/3 中加入

無水乙chun，加入量詳見瓶上的標簽。

1. 每 250 μl 液體樣品 (血清，血漿，腦脊液等)，加入 750 μl 裂解液 RLS，用移液器反復抽打幾次，然后劇烈震蕩 15 sec，充分混勻。（液體樣品和裂解液 RLS 的終體積比總是 1：3）

注意：對于含有高污染物樣品（如：高蛋白高血脂樣品），可以適當減少處理量，用 RNase-free H₂O 補足250μl后開始提取。

（例如：200μl樣品+50μl RNase-free H₂O + 750μl 裂解液 RLS。）

2. 將勻漿樣品在室溫下放置 5 min，使得he酸蛋白復合物wan全分離。

3. 加入 200μl lv仿，劇烈振蕩 15 秒，并在室溫下放置 2 min，

4. 13,000 rpm 離心 10 min。樣品會分成三層：上層無色的水相、中間層、下層有機相。RNA 存在于水相中，水相層的體積大約為所加裂解液 RLS體積的 70%。

5. 轉移上清（約 450 μl）至一個新的離心管中，加入 1.5 倍體積（675 μl）的無水乙chun，吹打混勻。

6. 轉移上清混合液（每次小于 750 μl，多則分 2 次）至 RNA 吸附柱中，12,000 rpm 離心 1 min，倒棄濾液。

7. 向 RNA 吸附柱內加入 700 μl Wash Solution 1（檢查是否已加入乙chun），12,000 rpm 離心 1 min，倒棄濾液。

8. 向 RNA吸附柱內加入 500 μl Wash Solution 2/3（檢查是否已加入乙chun），12,000 rpm 離心 1 min，倒棄濾液。

9. 重復步驟 8 一次。

10. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中，12,000 rpm 離心 2 min，除去膜上殘留的乙chun。

11. 取出 RNA 吸附柱，放入新的 RNase-Free 1.5 ml 離心管中，向吸附膜的中央部位懸空滴加 30~50 μl 的 RNase-Free ddH2O，室溫放置 1 min，12,000 rpm 離心 1 min，管底即包含 microRNA 的總 RNA。

12. 得到的 miRNA，可直接用于下游實驗，或于-70℃保存，避免 RNA 降解。

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