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EndoFree Plasmid Maxi Kit
彩色無內毒素質粒大提試劑盒
彩色無內毒素質粒大提試劑盒 核酸提取
目錄號：31115-10
產品組成 | 保存 | 10 preps |
Buffer BL | 室溫 | 25 ml |
Solution I | 室溫 | 100 ml |
Solution II | 室溫 | 100 ml |
Solution N3 | 室溫 | 100 ml |
ToxinOut Buffer | 室溫 | 60 ml |
Buffer WB2（concentrate） | 室溫 | 60 ml |
Buffer EB | 室溫 | 30 ml |
RNase A (10 mg/ml) | -20℃ | 1 ml |
MaxiSpin Columns with Collection Tubes （50 ml） | 室溫 | 10 個 |
Collection Tubes （50 ml） | 室溫 | 10 個 |
保存條件：
在室溫(15 ~ 25℃)干燥條件下，可保存 12 個月。
RNase A，可常溫運輸，-20℃保存。
本試劑盒用于無內毒素質粒 DNA 的大量制備，柱上去除內毒素，操作簡單。菌體經改良的堿裂解處理，質粒可從菌體中釋放出來，并特異、高效地被離心柱硅膠膜吸附。通過去蛋白液和漂洗液的清洗可去除蛋白及其他雜質，最后得到高純度的無內毒素質粒 DNA，所得質粒可直接用于mei切、轉化、PCR、測序、細胞轉染等分子生物學實驗。
小質粒（<10kb），拷貝數高，100ml 菌液通常能提到 500-1500ug 質粒；大質粒（>10kb），拷貝數低，200ml 菌液通常能提到 200-600ug 質粒。
1. du特工藝配方清除內毒素，內毒素含量極低（< 1 EU/ug DNA），細胞轉染效果ji佳。
2. 得率高： 150 – 300 ml 菌液可提出多達 500– 2000 ug 的純凈質粒；
1. 柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 2.5 ml 的Buffer BL，10,000 rpm 離心 2 min，棄收集管中濾液，將吸附柱重新放回收集管中。
2. 取 100 ~ 150 ml（最多 200 ml）過夜培養(yǎng)的菌液，室溫 10,000 rpm 離心 2 min，棄上清，收集菌體。
（注意： 如果菌液濃度高，收集 100ml 的菌體即可,菌液濃度低，收集 150-200ml 菌液。）
3.加入 10 ml Solution I，重懸菌體沉淀，渦旋震蕩至che底懸浮，呈現出均勻渾濁的棕紅色。
（注意：如有未che底懸浮的菌塊會影響裂解，導致提取的質粒濃度及純度降低）
4.加入 10 ml Solution II，顛倒混勻使菌體wan全裂解，直到溶液變清亮、粘稠的紫紅色。
（注意：不可 Votex 劇烈震蕩，以免造成基因組 DNA 片段的污染，所用時間不要超過 5 min，以免質粒受到破壞，如未wan全變得清亮，可能是菌體太多，可增加 Solution II 的用量，在后續(xù)的操作中 Solution N3 的用量也要相應增加）
5.加入 10 ml Solution N3，立即溫和顛倒混勻，可見紅黃相間的絮狀物產生，繼續(xù)混勻直
到wan全變?yōu)辄S色，靜置 2 min，然后室溫 10,000 rpm 離心 10 min，小心取上清至新管。
（注意：離心后在最上層可能會出現一層漂浮膜，注意不要倒入吸附柱）
6. 加入 0.3 倍濾液體積的異丙chun，上下顛倒混勻。分兩次（每次不超過 10 ml）轉入吸附柱中（吸附柱放入收集管中），10,000 rpm 離心 1 min，質粒被吸附在膜上，棄濾液，直到所有混合溶液通過此吸附柱。
7. 向吸附柱中加入 5 ml ToxinOut Buffer，室溫 10,000 rpm 離心 1 min，棄濾液。
8.加入 10 ml Buffer WB2，室溫 10,000 rpm 離心 1 min，棄濾液。
（注意：Buffer WB2 為濃縮液，按要求加入無水乙chun，用后應立即蓋緊瓶蓋，以防酒精揮發(fā)）
9.加入 5 ml Buffer WB2，室溫 10,000 rpm 離心 1 min，棄濾液。
10. 將吸附柱放進收集管，室溫 10,000 rpm 離心 5 min，甩干膜上殘留乙chun。
11. 將吸附柱置于一個新的 50 ml 離心管（自備）中，打開管蓋，室溫晾干 5 min，以免殘留乙chun影響下游應用。
12. 加入 1 ~ 2 ml 的洗脫液Buffer EB，室溫放置 2 min，12,000 rpm 離心 2 min，離心管底溶液即質粒 DNA。
（注意：事先在 65~70℃水浴中預熱洗脫緩沖液 EB，可增加洗脫效率；
如果需要較多量質粒，可將得到的質粒溶液重新加入吸附柱中，重復收集 3 次，可獲得最大洗脫率；如需使用去離子水洗脫，可用 NaOH 調整其 pH 值在 7.0 - 8.5 之間。）
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