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二胺氧化酶（Diamine Oxidase，DAO）試劑盒說明書
微量法 100T/48S
DAO(EC1.4.3.6)廣泛存在于動物（腸粘膜、肺、肝臟、腎臟等）、植物和微生物中。催化多胺氧化為醛，其活性與核酸和蛋白合成密切相關，能夠反映腸道機械屏障的完整性和受損傷程度。
DAO 催化尸胺產生醛和過氧化氫，外源添加過量的辣根過氧化物酶，催化過氧化氫氧化鄰聯茴香胺生成氧化型鄰聯茴香胺，在 460nm 處有特征吸收峰，通過測定該波長吸光度增加速率，計算 DAO 活性。
產品名稱 | BC6018-100T/48S | Storage |
提取液：液體 | 120ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 0.3ml | 4℃ |
試劑二：液體 | 2.5ml | 4℃ |
試劑三：液體 | 1.2ml | 4℃ |
說明書 | 一份 | |
需自備儀器和用品：
天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、蒸餾水。
1、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml
提取液）進行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 20min，取上清，置冰上待測。
2、細菌、真菌：按照細胞數量（104 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1ml 提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 10000g， 4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。
3、血清等液體：直接測定
1、分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 460nm，蒸餾水調零。
2、加樣表
對照管 | 測定管 | |||
粗酶液（μl） | 50 | 50 | ||
提取液（μl） | 128 | 108 | ||
試劑一（μl） | 2 | 2 | ||
試劑二（μl） | 20 | 20 | ||
試劑三（μl） | 20 |
混勻，37℃水浴 30min，微量石英比色皿/96 孔板，蒸餾水調零，測定 460nm 吸光值。ΔA=A 測定-A對照。
（1） 按樣本蛋白濃度計算：
酶活性定義：在pH7.2，溫度為 37℃條件下，每毫克組織蛋白每分鐘催化產生 1nmol H2O2 所需的酶量為一個酶活力單位（U）。
（2） 按樣本質量計算：
DAO 活性（nmol/min/mg prot）=A460 ×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T= 18×A460÷Cpre′ d
酶活性定義：在pH7.2，溫度為 37℃條件下，每克組織每分鐘催化產生 1nmol H2O2 所需的酶量定義
為一個酶活力單位。
（3） 按細胞數量計算：
DAO 活性（nmol/min/g 鮮重）=A460 ×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）÷T= 18×A460÷We′ d
酶活性定義：在pH7.2，溫度為 37℃條件下，每 104 個細胞每分鐘催化產生 1nmol H2O2 所需的酶量
定義為一個酶活力單位。
DAO 活性（nmol/min/104cell）=A460 ×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×細胞數量）÷T= 18×A460÷細胞數量e′ d
(4) 按液體體積計算
酶活性定義：在pH7.2，溫度為 37℃條件下，每毫升血清每分鐘催化產生 1nmol H2O2 所需的酶量定義為一個酶活力單位。
DAO 活性（nmol/min/ml）=A460 ×V 反總÷V 樣÷T= 18×A460
e′ d
ε：氧化型鄰聯茴香胺毫摩爾消光系數：7.5 L/mmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 反總：反應總體積， 0.2ml；V 樣：反應中樣本體積，0.05ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml； W：樣本質量，g；T：反應時間，30min
（1） 按樣本蛋白濃度計算：
酶活性定義：在pH7.2，溫度為 37℃條件下，每毫克組織蛋白每分鐘催化產生 1nmol H2O2 所需的酶量為一個酶活力單位（U）。
（2） 按樣本質量計算：
DAO 活性（nmol/min/mg prot）=A460 ×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T= 36×A460÷Cpre′ d
酶活性定義：在pH7.2，溫度為 37℃條件下，每克組織每分鐘催化產生 1nmol H2O2 所需的酶量定義為一個酶活力單位。
（3） 按細胞數量計算：
DAO 活性（nmol/min/g 鮮重）=A460 ×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）÷T= 36×A460÷We′ d
酶活性定義：在pH7.2，溫度為 37℃條件下，每 104 個細胞每分鐘催化產生 1nmol H2O2 所需的酶量
定義為一個酶活力單位。
(4) 按液體體積計算
DAO 活性（nmol/min/104cell）=A460 ×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×細胞數量）÷T= 36×A460÷細胞數量e′ d
酶活性定義：在pH7.2，溫度為 37℃條件下，每毫升血清每分鐘催化產生 1nmol H2O2 所需的酶量定
義為一個酶活力單位。
DAO 活性（nmol/min/ml）=A460 ×V 反總÷V 樣÷T= 36×A460 e′ d
ε：氧化型鄰聯茴香胺毫摩爾消光系數：7.5 L /mmol/cm；d：96 孔板光徑，0.5cm；V 反總：反應總體積，0.2ml；V 樣：反應中樣本體積，0.05ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml； W：樣本質量，g；T：反應時間，30min。
1、如果OD 值小于 0.01，適當加大提取用樣本量；OD 值大于 0.8，粗酶液可適當稀釋，或者減少提取用樣本量。
2、樣品蛋白質含量需要另外測定。
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