淀粉磷酸化酶（Starch phosphorylase，SP）試劑盒說明書

微量法 100 管/96 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

淀粉磷酸化酶（Starch Phosphorylase，SP）是淀粉代謝過程wei一的可逆反應酶，既可催化淀粉的合成，也可催化淀粉的分解。

在高等植物中，淀粉磷酸化酶（合成方向）主要存在于質體中，負責延長淀粉的 α-1,4-葡萄糖鏈的非還原末端；淀粉磷酸化酶（分解方向）主要存在于細胞質基質中，催化淀粉中的α-1,4-糖苷鍵磷酸解產生葡萄糖-1-磷酸，負責葡萄糖鏈的磷酸解，是淀粉代謝過程中的關鍵酶。

在植物體中，淀粉磷酸化酶分解方向的底物無機磷濃度比合成方向的底物葡萄糖-1-磷酸濃度幾乎高了兩個數量級，一般認為淀粉磷酸化酶只催化淀粉的分解，因此，分解方向的淀粉磷酸化酶具有重要測定意義。

測定原理：

淀粉磷酸化酶催化淀粉中的α-1,4-糖苷鍵與無機磷反應產生葡萄糖-1-磷酸，葡萄糖-1-磷酸在磷酸葡萄糖變位酶的作用下產生葡萄糖-6-磷酸，并在 6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化下還原 NADP+產生NADPH，使 340nm 下吸光值增加。

淀粉磷酸化酶試劑盒  淀粉系列-常備現貨

組成：

試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前加入 1.5ml 水溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存；試劑三：粉劑×1 支，-20℃保存；臨用前加入 1.5ml 水溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存。

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

自備儀器和用品：

酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。

樣本的前處理：

1、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液）進行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃，離心 10min，取上清待測。

2、細菌、真菌：按照細胞數量（10⁴ 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1ml 提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 10000g， 4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。

測定步驟：

1、酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 340nm；

2、工作液的配制：臨用前按照樣本量將試劑一、試劑二、試劑三按照 170μl:10μl:10μl 的比例混合，臨用前配制，半小時內使用。

3、在 96 孔板中加入 10μl 樣本和 190μl 工作液，立即混勻，記錄 340nm 處 1min 時的吸光值A1 和 6min時的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。

SP 活力單位的計算：

（1） 按樣本蛋白濃度計算

單位定義：每mg 組織蛋白每分鐘產生 1nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。

SP（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣×Cpr) ÷T

=1286×ΔA÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計算

單位定義：每g 組織每分鐘產生 1nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。

SP（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W ×V 樣÷V 樣總)÷T

=1286×ΔA÷W

（3） 按樣本細胞計算

單位定義：每萬個細胞每分鐘產生 1nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。

SP（nmol/min/10⁴ cell）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(細胞數量 ×V 樣÷V 樣總)÷T

=2.572×ΔA÷W

V 反總：反應體系總體積，2×10^-4 L；ε：NADPH 摩爾消光系數，6.22×10³ L / mol /cm；d：96 孔板光徑， 0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.01 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；細胞數量，500 萬。

淀粉磷酸化酶試劑盒  淀粉系列-常備現貨