中性轉化酶（Neutral invertase, NI）試劑盒說明書

微量法 100 管/48 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

蔗糖轉化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代謝關鍵酶之一。根據最適 pH，將高等植物Ivr 分為酸性轉化酶（AI）和中性轉化酶（NI）兩種類型。

NI 主要存在于細胞質中，負責分解細胞質中蔗糖為果糖和葡萄糖。

測定原理：

NI 催化蔗糖分解產生還原糖，進一步與 3,5－二硝基水楊酸反應，生成棕紅色氨基化合物，在 510nm有特征光吸收，在一定范圍內 510nm 光吸收值與還原糖生成量成正比。通過光吸收增加速率來計算 NI 活性

中性轉化酶試劑盒   蔗糖-常備現貨

組成：

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 10ml 試劑一充分溶解備用；用不完的試劑 4℃保存；

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

自備儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。

測定步驟和加樣表：

1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 510nm，蒸餾水調零。

2、樣本測定，（在 EP 管中依次加入下列試劑）：

混勻， 37℃準確水浴 30min 后，95℃水浴 10min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻后充分混勻（以保證濃度不變）

混勻，95℃水浴 10min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻后充分混勻，取 200μl 至微量石英比色皿或 96 孔板中， 510nm 處記錄各管吸光值 A，如果吸光值大于 2，可以用蒸餾水稀釋后測定（計算公式中乘以相應稀釋倍數），ΔA=A 測定-A 對照。每個測定管需設一個對照管。

NI 活性計算：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0016x -0.001；x 為標準品濃度（μg/ml），y 為吸光值。

（1） 按蛋白濃度計算：

單位的定義：37℃每mg 蛋白每分鐘產生 1μg 還原糖定義為一個酶活性單位。

NI 活性（μg/min /mg prot）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷Cpr

（2） 按鮮重計算：

單位的定義：37℃每g 組織每分鐘產生 1μg 還原糖定義為一個酶活性單位。

NI 活性（μg/min /g 鮮重）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W×V1÷V2) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷W

V1：加入反應體系中樣本體積，0.05ml；V2：加入提取液體積，1ml；T：反應時間，30min； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本鮮重，g。

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0008x -0.001；x 為標準品濃度（μg/ml），y 為吸光值。

（1） 按蛋白濃度計算：

單位的定義：37℃每mg 蛋白每分鐘產生 1μg 還原糖定義為一個酶活性單位。

NI 活性（μg/min /mg prot）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=41.6×(ΔA +0.001) ÷Cpr

（2） 按鮮重計算：

單位的定義：37℃每g 組織每分鐘產生 1μg 還原糖定義為一個酶活性單位。

NI 活性（μg/min /g 鮮重）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(W ×V1÷V2) ÷T =41.6×(ΔA +0.001) ÷W

V1：加入反應體系中樣本體積，0.05ml；V2：加入提取液體積，1ml；T：反應時間，30min； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本鮮重，g。

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