維生素 B1（Vitamin B1，VB1）試劑盒說明書

微量法 100T/96S

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

維生素B1（Vitamin B1）是構(gòu)成脫羧輔酶的主要成分，參與細胞代謝中的三羧酸循環(huán)，是維持機體正常代謝必須的水溶性維sheng素，在生物體能量代謝中有重要的作用。

測定原理：

VB1 在堿性條件下還原鐵氰hua鉀生成亞鐵氰hua鉀，亞鐵氰hua鉀與 Fe³⁺在弱酸條件下生成普魯士藍，在 704nm 有特征吸收峰。

維生素 B1試劑盒  常備現(xiàn)貨

組成：

自備儀器和用品：

天平、研缽、離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水浴鍋、蒸餾水。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

樣本處理：

1. 組織：將樣品磨碎，按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 0.6ml提取液）加入提取液，60℃浸提 30min，加蒸餾水 0.4ml，混勻后于 25℃，16000rpm 離心 10min，取上清測定（動物組織等蛋白含量較高的樣本建議離心 20-30min）。

2. 細胞：按照細胞數(shù)量（10⁴ 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 0.6ml提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；加蒸餾水 0.4ml，混勻后于 25℃，16000rpm 離心 10min，取上清測定。

3. 血清：直接測定。

測定操作：

計算公式：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線：y = 0.017x+0.0031，R² = 0.9991；x 為標準品濃度：μg/ml；y 為△A（A 測定管-A 空白管）

1. 按照蛋白含量計算

VB1 含量（μg/mg prot）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷Cpr

= 58.8×（△A-0.0031）÷ Cpr

2. 按照樣本質(zhì)量計算

VB1 含量（μg/g 鮮重）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷（W÷V 樣總）

= 58.8×（△A-0.0031）÷ W

3. 按照細胞數(shù)量計算

VB1 含量（μg/10⁴ cell）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷（細胞數(shù)量÷V 樣總）

= 58.8×（△A-0.0031）÷ 細胞數(shù)量

4. 按照液體體積計算

VB1 含量（μg/ml）=（△A-0.0031）÷ 0.017

= 58.8×（△A-0.0031）

V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g b．用 96 孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y = 0.0085x +0.0031，R2 = 0.9991；x 為標準品濃度：μg/ml；y 為△A（A 測定管-A 空白管）

1. 按照蛋白含量計算

VB1 含量（μg/mg prot）=（△A -0.0031）÷ 0.0085÷Cpr

= 117.65×（△A-0.0031）÷ Cpr

2. 按照樣本質(zhì)量計算

VB1 含量（μg/g 鮮重）=（△A-0.0031））÷ 0.0085÷（W÷V 樣總）

= 117.65×（△A-0.0031）÷ W

3. 按照細胞數(shù)量計算

VB1 含量（μg/104 cell）=（△A-0.0031）÷ 0.0085÷（細胞數(shù)量÷V 樣總）

= 117.65×（△A-0.0031）÷ 細胞數(shù)量

4. 按照液體體積計算

VB1 含量（μg/ml）=（△A-0.0031）÷ 0.0085

= 117.65×（△A-0.0031）

V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g

注意事項：

1. 若測定結(jié)果中吸光值超過 2，請將樣本稀釋后進行測定，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

2. 蛋白濃度較高的樣品，比如動物組織，若顯色完成后有沉淀產(chǎn)生，將樣本稀釋后再重新測定，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

3. 顯色完成后立即進行測定。

4. 標準曲線線性范圍為 0.1-10μg/ml。

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