植物花色苷含量試劑盒說明書

微量法 100 管/96 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

花色苷是一類易溶于極性溶劑的天然色素，屬黃酮類化合物。花色苷廣泛存在于植物的根、莖、葉、花和果實中，使其呈現由紅到紫等不同顏色，是植物主要的呈色物質。

測定原理：

采用pH 示差法測定花色苷含量，當 pH 為 1.0 時花色苷在 530nm 處有最大吸收峰,而當pH 為 4.5 時, 花色苷轉變為無色查爾酮形式,在 530 處無吸收峰, 利用此特性分別測定在不同pH 下的 530nm 和 700nm 處的吸光度值。pH 示差法減少了溶液pH 和溶劑差異的影響，排除了其他非花色苷類物質對檢測結果的干擾。

植物花色苷含量試劑盒   氧化系列

試劑的組成和配制：

需自備儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽和蒸餾水。

花色苷的提取：

按照烘干樣品質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 烘干樣品，加入 1ml 提取液），充分勻漿后轉移到 EP 管中，提取液定容至 1 ml，蓋緊后 4℃浸提 24 h，8000 g，常溫離心 10 min，取上清液待測。

測定步驟：

1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上；試劑一和試劑二 25℃（室溫）預熱 10min 以上；

2、取 20 µl 上清液和 180 µl 試劑一（相當于稀釋 10 倍），40℃水浴 20min，分別測定 530nm 和 700nm處的吸光值，分別記為A1 和A2。

3、 取 20 µl 上清液和 180 µl 試劑二（相當于稀釋 10 倍），40℃水浴 20min，分別測定 530nm 和 700nm處的吸光值，分別記為A3 和A4。

4、 計算△A=(A1-A2)-(A3-A4)

注意：

如果A1 大于 1，可以適當加大稀釋倍數，保證總體積 200 µl 不變，如 10 µl 上清液和 190 µl 試劑一（相當于稀釋 20 倍）；如果 A1 小于 0.1，可以適當縮小稀釋倍數，保證總體積不變，如 100 µl 上清液和 100 µl試劑一（相當于稀釋 2 倍），使A1 保持在 0.1~1 范圍內，可提高檢測靈敏度；同樣調整上清液和試劑二體積比例；計算時以實際稀釋倍數代入下述公式中。

花色苷含量計算：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

花色苷含量（µg/g 干重）=[ΔA×V÷（ε×d）×M×F×106]÷W=16.7×ΔA× F÷W

V：提取液體積，1×10-3L；ε：花色苷的摩爾消光系數，2.69×104 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm； M：花色苷的相對分子質量：449.2g/mol；F：稀釋倍數；106：1g=106µg；W：樣本干重：g。

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下

花色苷含量（µg/g 干重）=[ΔA×V÷（ε×d）×M×F×106]÷W=33.4×ΔA× F÷W

V：提取液體積，1×10-3L；ε：花色苷的摩爾消光系數，2.69×104 L / mol /cm；d：96 孔板光徑，0.5cm；

M：花色苷的相對分子質量：449.2g/mol；F：稀釋倍數；106：1g=106µg；W：樣本干重：g。 ΔA 線性范圍為 0.005-0.5。

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