植物花色苷含量試劑盒說(shuō)明書

微量法 100 管/96 樣

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

花色苷是一類易溶于極性溶劑的天然色素，屬黃酮類化合物。花色苷廣泛存在于植物的根、莖、葉、花和果實(shí)中，使其呈現(xiàn)由紅到紫等不同顏色，是植物主要的呈色物質(zhì)。

測(cè)定原理：

采用pH 示差法測(cè)定花色苷含量，當(dāng) pH 為 1.0 時(shí)花色苷在 530nm 處有最大吸收峰,而當(dāng)pH 為 4.5 時(shí), 花色苷轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)色查爾酮形式,在 530 處無(wú)吸收峰, 利用此特性分別測(cè)定在不同pH 下的 530nm 和 700nm 處的吸光度值。pH 示差法減少了溶液pH 和溶劑差異的影響，排除了其他非花色苷類物質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾。

植物花色苷含量試劑盒   氧化系列

試劑的組成和配制：

需自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽和蒸餾水。

花色苷的提取：

按照烘干樣品質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 烘干樣品，加入 1ml 提取液），充分勻漿后轉(zhuǎn)移到 EP 管中，提取液定容至 1 ml，蓋緊后 4℃浸提 24 h，8000 g，常溫離心 10 min，取上清液待測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上；試劑一和試劑二 25℃（室溫）預(yù)熱 10min 以上；

2、取 20 µl 上清液和 180 µl 試劑一（相當(dāng)于稀釋 10 倍），40℃水浴 20min，分別測(cè)定 530nm 和 700nm處的吸光值，分別記為A1 和A2。

3、 取 20 µl 上清液和 180 µl 試劑二（相當(dāng)于稀釋 10 倍），40℃水浴 20min，分別測(cè)定 530nm 和 700nm處的吸光值，分別記為A3 和A4。

4、 計(jì)算△A=(A1-A2)-(A3-A4)

注意：

如果A1 大于 1，可以適當(dāng)加大稀釋倍數(shù)，保證總體積 200 µl 不變，如 10 µl 上清液和 190 µl 試劑一（相當(dāng)于稀釋 20 倍）；如果 A1 小于 0.1，可以適當(dāng)縮小稀釋倍數(shù)，保證總體積不變，如 100 µl 上清液和 100 µl試劑一（相當(dāng)于稀釋 2 倍），使A1 保持在 0.1~1 范圍內(nèi)，可提高檢測(cè)靈敏度；同樣調(diào)整上清液和試劑二體積比例；計(jì)算時(shí)以實(shí)際稀釋倍數(shù)代入下述公式中。

花色苷含量計(jì)算：

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

花色苷含量（µg/g 干重）=[ΔA×V÷（ε×d）×M×F×106]÷W=16.7×ΔA× F÷W

V：提取液體積，1×10-3L；ε：花色苷的摩爾消光系數(shù)，2.69×104 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm； M：花色苷的相對(duì)分子質(zhì)量：449.2g/mol；F：稀釋倍數(shù)；106：1g=106µg；W：樣本干重：g。

b. 用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

花色苷含量（µg/g 干重）=[ΔA×V÷（ε×d）×M×F×106]÷W=33.4×ΔA× F÷W

V：提取液體積，1×10-3L；ε：花色苷的摩爾消光系數(shù)，2.69×104 L / mol /cm；d：96 孔板光徑，0.5cm；

M：花色苷的相對(duì)分子質(zhì)量：449.2g/mol；F：稀釋倍數(shù)；106：1g=106µg；W：樣本干重：g。 ΔA 線性范圍為 0.005-0.5。

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